甘松组织培养无菌体系建立的重点在于甘松外植体部位的选定。前期实验分别选用了甘松的根(根芽、根芽茎、根茎),茎(茎基、茎段)及芽进行组织培养,结果表明甘松茎基的萌发率最高,因此选用甘松茎基作为外植体。将外植体切段放入45℃温水吐温10分钟,再用流水冲洗1小时;然后将冲洗好的外植体置于超净台上用无菌水冲洗1次,再用75%酒精浸泡15秒,之后用0.1%升汞溶液浸泡8~10 分钟;接着用无菌水冲洗1次后接种到空白MS培养基中进行培养。
项目组将用接种成活的甘松组培苗进行增殖培养,即以MS培养基作为基本培养基,将生长健壮的组培苗从茎基部切取,重新接种到新的培养基中进行增殖培养,当材料增殖到一定数量后,再进行生根培养。
甘松组织培养是甘松繁育体系中的重要内容,通过“中藏药-甘松”项目实验研究,掌握组织技术后,将呈现两方面效益:一是组织培养利用植株个体进行无性繁殖可避免大量采集草本植物甘松种子难度大的制约;二是此项研究相对传统的种子繁殖,可加快繁殖效率,保护生态环境,拓宽中藏药产业化发展中的种苗供应途径。